藻蓝蛋白的纯化及功能饮料配方的开发
本文针对螺旋藻中藻蓝蛋白进行开发,运用双水相萃取法和等电点沉淀法等对藻蓝蛋白进行纯化,消除重金属和藻毒素污染,获得的高质量藻蓝蛋白原料被进一步开发为功能性饮料.藻毒素测定方法
藻毒素通过HPLC(Aglient HPLC 1 100)检测,采用C18柱(Cosmosil 5C18-AR,column 250 mmx 4.6mm,Japan),柱温控制在40 ℃,检测波长为238 nm流动相为0.05%(V/V)三氟乙酸:甲醇-45:55,流速为1 mlL/min.
含污染物的藻蓝蛋白粗提液制备
将螺旋藻片充分研磨,称取2g粉末,加入pH-7.2质量浓度为0.01 mol/L的磷酸缓冲液500 mL,在冰浴中超声粉碎10 min,然后以4000 r/min的速度离心20 min,上清液即为藻蓝蛋白粗提液向该粗提液中加入微囊藻毒素MC-RR和MC-LR(终浓度均为3.5 ug/mL),以及氯化镉母液(终浓度为2ug/mL)
藻蓝蛋白的分离纯化

向含污染物的藻蓝蛋白粗提液中添加PEG 4000,硫酸钠、氯化钾配置双水相溶液",搅拌1h,移入分液漏斗中,静置过夜后分液取上层溶液,调节等电点至3.41,静置20min后,以4000 r/min的速度离心20 min,取沉淀,用pH-7.2质量浓度为0.01 molL的磷酸缓冲液定容至25 mL.测藻蓝蛋白提取液的质量浓度和纯度,以及藻毒素和镉的质量浓度镉通过ICP(电感耦合等离子体发射光谱仪,Optima 2100,PE)测定1.6藻蓝蛋白饮料制备
结果与分析
藻蓝蛋白的纯化:经过双水相和等电点沉淀后,藻蓝蛋白的纯度显著提高,为原来的21.9倍其中双水相萃取的纯化效率最高,但是整个提取过程中,藻蓝蛋白略有损失,在等电点沉淀过程损失最大.
藻蓝蛋白纯化后镉离子质量浓度变化:所购原料中的镉离子质量浓度含量较低仅为0.001 7LgmL,为了能够反映出纯化过程对镉离子的去除效应,我们采用人工添加的方式,添加量为2ug/mL,使粗提液中的镉离子大幅度超标然后通过双水相和等电点沉淀后镉离子的质量浓度依然降到与原来相当的水平,仅为0.002 3 ug/mlL.
藻蓝蛋白纯化后藻毒素浓度变化:与镉离子污染类似,为了能够反应出纯化过程对藻毒素的去除效应,采用人工添加的方式,使粗提液中的藻毒素含量大幅度超标(图1)然而通过双水相和等电点沉淀后藻毒素的含量降到检测线以下.
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